Différence clé - Chromatographie papier vs couche mince vs colonne
La chromatographie sur papier, la chromatographie sur couche mince et la chromatographie sur colonne sont trois types de techniques chromatographiques. La principale différence entre la chromatographie sur papier, la chromatographie sur couche mince et la chromatographie sur colonne est basée sur le type de phase stationnaire utilisé dans la technique de chromatographie. La chromatographie sur papier utilise un papier cellulosique comme phase stationnaire, la chromatographie sur couche mince utilise de l'alumine ou du gel de silice comme phase stationnaire, tandis que la chromatographie sur colonne utilise une colonne remplie d'un matériau matriciel approprié comme phase stationnaire.
Dans le processus de séparation et d'identification des biomolécules telles que les protéines et les glucides, la chromatographie est une technique biophysique importante utilisée. La chromatographie sépare les composés en fonction de leur solubilité, taille et charge. Sur la base du mécanisme de séparation, la chromatographie utilise des mécanismes tels que l'échange d'ions, l'absorption, la partition et l'exclusion de taille et il existe trois techniques chromatographiques; à savoir, chromatographie sur papier, couche mince et colonne. La chromatographie sur papier est basée sur l'adsorption solide-liquide et la solubilité du composé, et elle utilise un papier de cellulose comme phase stationnaire. La chromatographie sur couche mince est basée sur l'adsorption solide-liquide de molécules. Il a une phase stationnaire qui est typiquement constituée d'alumine ou de gel de silice et la phase mobile qui est le solvant. La chromatographie sur colonne utilise une colonne remplie d'une matrice qui est utilisée pour séparer les molécules principalement en fonction de leur taille, de leur affinité ou de leur charge.
CONTENU
1. Aperçu de la chromatographie et différence clé
2. Qu'est-ce que la chromatographie sur papier
3. Qu'est-ce que la chromatographie sur couche mince
4. Qu'est-ce que la chromatographie sur colonne
5. Similitudes entre la chromatographie sur papier, sur couche mince et sur colonne
6. Comparaison côte à côte - Papier vs couche mince vs Chromatographie sur colonne sous forme tabulaire
7. Résumé
Qu'est-ce que la chromatographie sur papier?
La chromatographie sur papier est le type de chromatographie le plus simple utilisé et elle n'est pas utilisée pour des recherches approfondies. Il est principalement utilisé dans les laboratoires étudiants pour identifier les biomolécules telles que les acides aminés et les glucides présents dans les mélanges. La chromatographie sur papier utilise une phase stationnaire réalisée avec du papier cellulose ou du papier filtre Whatman et une phase mobile généralement préparée avec des solvants organiques tels que le n-butanol, etc. La phase stationnaire est saturée en eau, rendant la phase stationnaire liquide. Ainsi, lorsque les composés sont repérés et laissés couler en présence de la phase mobile, en fonction de la solubilité des composés, ils sont séparés. Ainsi, lors du développement du chromatogramme, une coloration peut être effectuée pour déterminer la longueur de chaque composé. Le facteur de rétention peut ainsi être calculé.
Figure 01: Chromatographie sur papier
La chromatographie sur papier peut en outre être classée comme chromatographie sur papier ascendante et chromatographie sur papier descendante en fonction de la direction du solvant en circulation.
Qu'est-ce que la chromatographie sur couche mince?
La chromatographie sur couche mince ou TLC est une technique couramment utilisée pour identifier différents acides aminés présents dans un mélange ou pour l'identification de protéines. La technique de séparation est basée sur l'adsorption solide-liquide. Pendant la chromatographie sur couche mince, une plaque en alumine ou en gel de silice est utilisée comme phase stationnaire. Le mélange de solvants varie selon les besoins et peut utiliser différentes combinaisons de composés organiques tels que le n-butanol, l'acide acétique et l'eau pour préparer le solvant. Les composés à séparer sont déposés sur la plaque et immergés dans le mélange de solvants. Une fois le solvant remonté en fonction de l'action capillaire donnée par la plaque, les composés repérés sur la plaque se déplacent également en fonction de leur solubilité dans le solvant.
Figure 02: Chromatographie sur couche mince
La détection des taches après le chromatogramme est exécutée par différentes procédures de coloration. Certains utilisent une coloration à la ninhydrine qui est une méthode de coloration assez toxique. Les chromatogrammes modernes sur couche mince utilisent des techniques de fluorescence pour visualiser le chromatogramme après l'analyse. En fonction des distances parcourues, le temps de rétention de chaque composé peut être calculé. Cela peut être utilisé pour identifier le type de composé séparé en fonction du mélange utilisé. La CCM est principalement utilisée pour identifier les acides aminés dans un mélange de protéines et également pour séparer différents types de monosaccharides présents dans un mélange.
Qu'est-ce que la chromatographie sur colonne?
La chromatographie sur colonne est un terme large utilisé pour décrire de nombreux types de techniques de chromatographie qui utilisent la méthode de séparation basée sur la colonne. En chromatographie sur colonne, une colonne physique est utilisée avec un matériau de garnissage pour séparer les composés. La séparation peut être basée sur différentes propriétés physiques présentées par les composés. Ces propriétés peuvent être la charge, la taille, la conformation 3D et la capacité de liaison, etc. Ainsi, la colonne remplie du matériau de matrice agit comme phase stationnaire et le tampon de lavage appliqué à la colonne agit comme phase mobile.
Si les molécules sont séparées en fonction de la taille, le matériau de garnissage est emballé de manière à laisser des pores pour que les composés puissent traverser. Ainsi, les molécules plus grosses qui ne peuvent pas circuler à travers les pores sont éluées en premier, tandis que les molécules plus petites mettent beaucoup plus de temps à éluer.
Figure 03: Chromatographie sur colonne
Si les molécules sont séparées en fonction de leur charge, la phase stationnaire contiendra un échangeur d'anions ou de cations vers lequel les composés seront attirés en fonction de leur charge. Ainsi lors de l'étape de lavage, les composés non liés seront élués. Lors de l'ajout du tampon d'élution, les composés chargés liés seront élués. La détection de ces éluants est principalement basée sur des techniques spectrophotométriques.
Quelles sont les similitudes entre la chromatographie sur couche mince de papier et la chromatographie sur colonne?
- Toutes les trois techniques de chromatographie sur couche mince et colonne de papier sont utilisées pour la séparation de biomolécules telles que les acides aminés, les protéines et les glucides.
- Les techniques de chromatographie sur couche mince de papier et sur colonne ont une phase mobile et une phase stationnaire.
- Les techniques de chromatographie sur couche mince de papier et sur colonne utilisent des mécanismes biophysiques pour la séparation.
Quelle est la différence entre la chromatographie en couche mince sur papier et la chromatographie sur colonne?
Diff article au milieu avant la table
Chromatographie papier vs couche mince vs colonne |
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| Chromatographie sur papier | La chromatographie sur papier est une technique chromatographique utilisée pour séparer les composés en fonction de l'adsorption liquide-liquide et de la solubilité du composé. Il utilise un papier cellulosique comme phase stationnaire. |
| Chromatographie sur couche mince | La chromatographie sur couche mince est une autre technique chromatographique basée sur l'adsorption solide-liquide de molécules. Il a une phase stationnaire faite d'alumine ou de gel de silice et un solvant comme phase mobile, qui est le solvant. |
| Chromatographie sur colonne | La chromatographie sur colonne utilise une colonne remplie d'une matrice qui est utilisée pour séparer les molécules principalement en fonction de leur taille, de leur affinité ou de leur charge. |
| État stationnaire | |
| Chromatographie sur papier | Le papier en nitrocellulose de Whatman est utilisé comme phase stationnaire dans la chromatographie sur papier. |
| Chromatographie sur couche mince | Le gel d'alumine ou de silice est utilisé comme phase stationnaire de la chromatographie sur couche mince. |
| Chromatographie sur colonne | Une colonne remplie de matériau de garnissage approprié est utilisée comme phase stationnaire dans la chromatographie sur colonne. |
| Phase mobile | |
| Chromatographie sur papier | Le solvant courant est la phase mobile de la chromatographie sur papier. |
| Chromatographie sur couche mince | Le solvant courant est la phase mobile de la chromatographie sur couche mince. |
| Chromatographie sur colonne | Le tampon de lavage est la phase mobile de la chromatographie sur colonne. |
| Mécanismes utilisés pour la séparation | |
| Chromatographie sur papier | La chromatographie sur papier est basée sur l'absorption solide-liquide. |
| Chromatographie sur couche mince | La chromatographie sur couche mince est basée sur l'absorption solide-liquide. |
| Chromatographie sur colonne | La chromatographie sur colonne est basée sur l'exclusion de taille, la charge et la forme. |
| Tampon d'élution | |
| Chromatographie sur papier | Non requis par chromatographie sur papier. |
| Chromatographie sur couche mince | Non requis pour la chromatographie sur couche mince. |
| Chromatographie sur colonne | Requis en chromatographie sur colonne. |
| Détection | |
| Chromatographie sur papier | Coloration et en déterminant le facteur de rétention. |
| Chromatographie sur couche mince | Coloration et en déterminant le facteur de rétention. |
| Chromatographie sur colonne | Détermination spectrophotométrique. |
Résumé - Chromatographie sur couche mince de papier ou sur colonne
La chromatographie sur papier, la CCM et la chromatographie sur colonne sont des techniques de séparation utilisées pour séparer les biomolécules telles que les protéines, les acides aminés et les glucides (principalement les monosaccharides). La chromatographie sur papier utilise un papier cellulosique comme phase stationnaire et le mécanisme de séparation est basé sur l'adsorption solide-liquide. TLC utilise également des mécanismes d'adsorption solide-liquide. Les molécules sont séparées sur la phase stationnaire, en fonction de leur solubilité dans la phase mobile. La chromatographie sur colonne utilise des propriétés physiques telles que la taille, la forme, la charge et le poids moléculaire du composé à séparer. La colonne remplie de matériau de matrice agit comme phase stationnaire, tandis que le tampon de lavage agit comme phase solvant. C'est la différence entre une couche mince de papier et une chromatographie sur colonne.
