Différence clé - RAPD vs RFLP
Les marqueurs génétiques sont utilisés en biologie moléculaire pour identifier les variations génétiques entre les individus et les espèces. L'ADN polymorphe amplifié aléatoire (RAPD) et le polymorphisme de longueur des fragments de restriction (RFLP) sont deux marqueurs moléculaires importants couramment utilisés dans les laboratoires. RAPD est réalisé avec des amorces oligonucléotidiques courtes et arbitraires, et il est basé sur l'amplification aléatoire des multiples emplacements dans tout l'ADN matrice de l'organisme. La RFLP est réalisée avec une endonucléase de restriction spécifique, et elle est basée sur le polymorphisme des fragments de restriction résultants et de l'hybridation. La principale différence entre RAPL et RFLP est que RAPD est un type de technique de PCR réalisé sans la connaissance préalable de la séquence, tandis que le RFLP n'est pas impliqué dans la PCR et nécessite une connaissance préalable de la séquence pour mettre en œuvre la technique.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que RAPD
3. Qu'est-ce que RFLP
4. Comparaison côte à côte - RAPD vs RFLP
5. Résumé
Qu'est-ce que RAPD?
RAPD est un marqueur moléculaire utile en biologie moléculaire. C'est une technique simple et rapide. RAPD peut être défini comme une méthode qui aboutit à des séquences d'ADN polymorphes à la suite d'une amplification aléatoire de plusieurs emplacements de la matrice d'ADN cible. RAPD utilise de courtes amorces oligonucléotidiques avec des séquences arbitraires pour l'amplification par PCR. Les amorces sont synthétisées artificiellement sans la connaissance préalable de la séquence. Par conséquent, il est considéré comme une technique facile et utile.
Les étapes majeures suivantes sont impliquées dans RAPD.
- Extraction de l'ADN cible
- Amplification des multiples emplacements de l'ADN cible à l'aide d'amorces choisies au hasard
- Électrophorèse sur gel des produits de PCR amplifiés
- Coloration au bromure d'éthidium et identification du polymorphisme
En raison de la variation de l'hybridation de l'amorce, différents fragments de différentes longueurs sont générés pendant l'amplification. Par conséquent, les motifs de bandes sur les gels sont différents selon les individus et les espèces. Ainsi, RAPD permet la détection de la variation génétique entre les organismes dans l'identification et la différenciation.
RAPD est appliqué dans diverses études de biologie moléculaire telles que l'identification de la différence génétique entre des espèces étroitement apparentées, la cartographie génétique, la prise d'empreintes ADN, l'identification de maladies héréditaires, etc.
Figure 01: RAPD
Qu'est-ce que RFLP?
Les polymorphismes de longueur des fragments de restriction (RFLP) sont un marqueur moléculaire utilisé en biologie moléculaire pour l'identification de la variation génétique dans des séquences d'ADN homologues. C'est le premier marqueur génétique développé pour la prise d'empreintes ADN. Tous les organismes produisent des profils ADN uniques lorsqu'ils sont restreints par des enzymes de restriction spécifiques. Le RFLP est un outil important dans la production de profils ADN uniques d'individus et la détection de la variation génétique entre eux. Lorsque les échantillons d'ADN sont digérés avec des endonucléases de restriction spécifiques, cela donne différents profils d'ADN qui sont uniques à chaque individu. Par conséquent, le principal de cette méthode est la détection de la variation génétique parmi les organismes en restreignant l'ADN homologue avec des enzymes de restriction spécifiques et l'analyse du polymorphisme de la longueur des fragments par électrophorèse sur gel et transfert. Les modèles de transfert sont uniques à chaque organisme et caractérisent les génotypes spécifiques.
Les étapes suivantes sont impliquées dans RFLP.
- Isolement d'une quantité suffisante d'ADN à partir d'échantillons
- Fragmentation des échantillons d'ADN avec des endonucléases de restriction spécifiques en séquence courte
- Séparation des fragments résultants de différentes longueurs par électrophorèse sur gel d'agarose.
- Transfert du profil de gel dans une membrane par Southern blot
- Hybridation de la membrane avec des sondes marquées et analyse du polymorphisme de la longueur des fragments dans chaque profil
RFLP a diverses applications telles que le diagnostic des maladies héréditaires, la cartographie du génome, l'identification criminelle dans les études médico-légales, les tests de paternité, etc.
Figure 02: Génotypage RFLP
Quelle est la différence entre RAPD et RFLP?
Diff article au milieu avant la table
RAPD vs RFLP |
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| RAPD est un marqueur moléculaire basé sur des amorces aléatoires et PCR. | RFLP est un marqueur moléculaire basé sur la production de différents fragments de restriction de longueur. |
| Échantillon requis | |
| De petits échantillons d'ADN suffisent pour l'analyse RAPD. | Une grande quantité d'échantillon d'ADN extrait est nécessaire pour l'analyse RFLP. |
| Temps | |
| RAPD est un processus rapide. | RFLP est un processus qui prend du temps. |
| Utilisation de l'apprêt | |
| Des amorces aléatoires sont utilisées et les mêmes amorces peuvent être utilisées pour différentes espèces. | Des sondes spécifiques à l'espèce sont utilisées dans RFLP pour l'hybridation. |
| Fiabilité | |
| La fiabilité de la technique est moindre par rapport au RFLP. | RFLP est une technique fiable. |
| Le buvardage | |
| RAPD implique le transfert de Southern. | Le transfert Southern est une étape du RFLP. |
| Détection de la variation allélique | |
| Les variations alléliques ne peuvent pas être détectées par RAPD. | Les variations alléliques peuvent être détectées par RFLP. |
| Besoin de connaissances en séquence | |
| RAPD ne nécessite pas de connaissance préalable des séquences. | Une connaissance préalable de la séquence est requise pour la conception de la sonde. |
| PCR | |
| La PCR est impliquée dans RAPD | La PCR n'est pas impliquée avec RFLP. |
| Reproductibilité | |
| RAPD a une faible reproductibilité | Le RFLP a une reproductibilité élevée par rapport au RAPD. |
Résumé - RAPD vs RFLP
RAPD et RFLP sont des marqueurs importants utilisés en biologie moléculaire. Les deux méthodes sont capables de détecter les variations génétiques entre les organismes. RAPD est effectué à l'aide d'amorces aléatoires. La RFLP est réalisée à l'aide d'enzymes de restriction spécifiques. Les deux méthodes produisent des profils ADN uniques aux organismes individuels. RAPD implique relativement peu d'étapes que RFLP. Mais il produit des résultats moins fiables et reproductibles que RFLP. C'est la principale différence entre RAPD et RFLP.
