Différence Entre La Page SDS Et La Page Native

2024 Auteur: Mildred Bawerman | [email protected]. Dernière modifié: 2023-12-16 08:38

Différence clé - Page SDS vs page native

Le SDS et la page native sont deux types de techniques d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide utilisées en biologie moléculaire. La principale différence entre la page SDS et la page native est le type de gel de polyacrylamide utilisé. Dans la page SDS, un gel dénaturant est utilisé, les molécules sont donc séparées en fonction de leur poids moléculaire. En revanche, dans Native Page, des gels non dénaturants sont utilisés. Par conséquent, les molécules sont séparées en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme.

L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide (Page) utilise un gel fabriqué en polymérisant des monomères d'acrylamide avec du méthylène bisacrylamide. Le polyacrylamide est plus résistant et plus stable à la chaleur que l'agarose. Les gels de polyacrylamide ont une plus petite taille de pores qui permet une séparation efficace des protéines. Il existe deux principaux types de mise en page, à savoir la page SDS et la page native. La page SDS ou l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide sulfate de dodécyle de sodium sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Les gels dénaturants sont utilisés dans la page SDS. Native Page utilise des gels non dénaturants et sépare les protéines en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme (conformation 3D).

CONTENU

1. Présentation et différence clé

2. Qu'est-ce que la page SDS

3. Qu'est-ce que la page native

4. Similitudes entre la page SDS et la page native

5. Comparaison côte à côte - Page SDS vs page native sous forme tabulaire

6. Résumé

Qu'est-ce que la page SDS?

La page SDS est la technique électrophorétique la plus couramment utilisée pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire. Le gel est fabriqué en ajoutant du SDS (Sodium dodecyl sulfate), qui est un détergent. Le SDS transforme les protéines en monomères. Le SDS est un détergent anionique. Par conséquent, il ajoute une charge négative nette aux protéines dans une large gamme de pH. Lorsque la charge négative nette est conférée aux molécules de protéines, en raison de la variation de charge, les structures complexes sont décomposées. En raison de la charge négative, les protéines s'attirent vers l'extrémité positive. Ainsi, les molécules de poids moléculaire inférieur se déplacent plus rapidement sur la matrice de gel et peuvent être observées près de l'anode, tandis que les protéines de poids moléculaire plus élevé sont observées plus près des puits.

Figure 01: Page SDS

La liaison du SDS à la chaîne polypeptidique est proportionnelle à sa masse moléculaire relative. Par conséquent, la masse moléculaire peut également être déterminée via la page SDS. La coloration des gels SDS Page se fait par coloration au bleu de bromophénol. Les applications de la gamme de pages SDS dans une plus large mesure où elles peuvent être utilisées pour estimer la masse moléculaire relative et pour déterminer l'abondance relative des protéines dans un mélange de protéines. La page SDS peut également être utilisée pour déterminer la distribution des protéines dans un mélange de protéines. La page SDS est également appliquée pour purifier et évaluer les protéines. Il est utilisé comme procédure préliminaire pour le transfert de Western et l'hybridation, qui à son tour est utilisé pour la cartographie et l'identification des protéines.

Qu'est-ce que la page native?

L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide natif (Native Page) utilise un gel non dénaturant. Par conséquent, le SDS ou tout autre agent dénaturant n'est pas ajouté à la matrice de gel. Dans Native Page, la séparation des protéines est basée sur la charge et la taille de la protéine. Par conséquent, la mobilité de la protéine dépend de la charge et de la taille de la protéine.

La charge de la protéine dépend des chaînes latérales des acides aminés. Si les chaînes latérales sont chargées négativement, la protéine recevra une charge négative globale et vice versa. Les protéines conservent une conformation 3D en raison du pliage qui a lieu. Le pliage résulte des différents types de liaisons dans les protéines telles que les liaisons disulfure, les interactions hydrophobes et les liaisons hydrogène. Par conséquent, si la Page native est transportée à un pH neutre, les protéines seront séparées selon la forme moléculaire de la protéine. Par conséquent, la page native peut être utilisée comme technique sensible pour détecter le changement de charge ou de conformation de la protéine.

Le principal avantage de la page native est que la protéine utilisée pour l'analyse de la page peut être récupérée dans son état d'origine après l'analyse de la page, car la protéine n'est pas perturbée pendant le processus. La page native est une technique à débit relativement élevé et la stabilité de la protéine est augmentée.

Figure 02: Page native

À la fin de l'analyse du gel, le gel Native Page peut être visualisé par coloration avec du bleu de bromophénol ou tout autre réactif de coloration approprié. Les applications de Native Page comprennent la séparation de protéines acides, y compris des glycoprotéines telles que l'érythropoïétine humaine recombinante ou l'identification de protéines présentes dans l'albumine sérique bovine (BSA).

Quelles sont les similitudes entre la page SDS et la page native?

• Les systèmes SDS Page et Native Page utilisent un gel de polyacrylamide comme matrice du gel.
• Les deux sont utilisés pour la séparation et l'identification des protéines.
• Les deux utilisent la mobilité électrophorétique pour séparer les composés.
• Les deux peuvent être effectués de manière verticale ou horizontale (principalement sous forme de mises en page verticales car la longueur de tirage est plus longue).
• L'appareil d'électrophorèse comprenant le réservoir de gel, les peignes, l'alimentation électrique est nécessaire pour le fonctionnement des deux techniques.
• La visualisation du gel peut être effectuée par des méthodes de coloration dans les deux techniques.

Quelle est la différence entre la page SDS et la page native?

Diff article au milieu avant la table

Page SDS vs page native
La page SDS ou la page Sodium-dodécyl sulfate sépare les protéines en fonction de leur poids moléculaire et utilise un gel dénaturant.	Native Page utilise des gels non dénaturants et sépare les protéines en fonction de leur taille, de leur charge et de leur forme (conformation 3D).
Type de gel
Un gel dénaturant est utilisé dans la page SDS.	Un gel non dénaturant est utilisé dans la page native.
Présence de SDS
Le SDS est présent en tant que détergent pour conférer une charge négative à l'échantillon dans la page SDS.	SDS n'est pas présent dans la page native.
Base de séparation
La séparation des protéines dépend du poids moléculaire de la protéine dans la page SDS.	La séparation dépend de la taille et de la forme de la molécule de protéine dans la page native.
Stabilité de la protéine
La stabilité de la protéine est faible dans la page SDS.	La stabilité des protéines est élevée dans la page native.
Récupération de la protéine d'origine
Impossible car il est dénaturé dans la page SDS.	Possible sur la page native.

Résumé - Page SDS vs page native

La page SDS et la page native sont deux types de techniques d'électrophorèse sur gel de polyacrylamide utilisées pour séparer les protéines. La page SDS est traitée avec un détergent appelé SDS. Le SDS confère une charge négative globale à la protéine, ce qui entraîne alors la dénaturation de la protéine. Par conséquent, les protéines sont séparées en fonction de leur poids moléculaire. En revanche, la technique Native Page n'utilise aucun agent dénaturant. Ainsi, les protéines sont soit séparées en fonction de leur taille ou de leur forme. C'est la différence entre la page SDS et la page native.