Différence clé - ADN ligase T4 vs T7
L'ADN ligase est une enzyme importante utilisée dans les techniques de biologie moléculaire. Il fonctionne comme une colle moléculaire pour joindre les nucléotides en formant des liaisons phosphodiester entre les nucléotides. Les liaisons phosphodiester sont formées entre l'extrémité hydroxyle 3 'du fragment sucre et le groupe phosphate de l'extrémité 5'. L'ADN ligase est vitale dans le processus de réplication pour joindre les fragments d'Okazaki du brin en retard et pendant les mécanismes de réparation de l'ADN et les expériences de clonage in vitro pour joindre le gène d'intérêt souhaité au génome du vecteur. Il existe actuellement deux ADN ligases principales utilisées par les biologistes moléculaires: les ADN ligases T4 et T7. L'ADN ligase T4 est l'une des premières enzymes à être isolée du bactériophage T4. L'ADN ligase T7, qui est une protéine plus petite, est une enzyme isolée du bactériophage T7. C'est la principale différence entre les ADN ligases T4 et T7.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Quelle est l'action de l'ADN ligase
3. Qu'est-ce que l'ADN ligase T4
4. Qu'est-ce que l'ADN ligase T7
4. Similitudes entre l'ADN ligase T4 et T7
5. Comparaison côte à côte - ADN ligase T4 vs T7 sous forme tabulaire
6. Résumé
Quelle est l'action de l'ADN ligase?
La ligature de l'ADN se produit dans une réaction en trois étapes. La première étape est une attaque nucléophile sur l'alpha-phosphore de l'ATP générant un intermédiaire enzyme-adénylate covalent dans lequel l'AMP est lié à l'azote de la chaîne latérale terminale de la lysine. Dans la seconde étape, une attaque nucléophile se produit sur le phosphore de l'enzyme-adénylate par le substrat d'ADN à terminaison 5'-phosphate, libérant de la lysine et formant l'ADN-adénylate. Dans l'étape finale, l'ADN-adénylate est attaqué par 3'-OH d'un autre brin d'ADN, libérant de l'AMP et rejoignant les polynucléotides.
Qu'est-ce que la T4 DNA Ligase?
La T4 Ligase a été la première ligase à être isolée et identifiée par Meselson, Weigle et Kellenberger et a été la première ligase commerciale jamais produite. L'ADN ligase T4 est une enzyme dépendante de l'ATP qui catalyse la formation de liaisons phosphodiester. Il s'agit d'une chaîne polypeptidique unique avec 487 résidus d'acides aminés et a un poids moléculaire d'environ 77 kDa. Le pH optimal pour son activité se situe entre 7,5 et 8.
Figure 01: ADN ligase T4
L'ADN ligase T4, comme son nom l'indique, est présente dans le bactériophage T4 et a été isolée lorsque le phage a produit l'enzyme lors d'une infection par E. coli. L'enzyme lie des duplex d'ADN double brin avec des extrémités franches et les fragments à lier doivent être très proches les uns des autres.
Qu'est-ce que la T7 DNA Ligase?
La ligase T7 est une protéine de 41 kDa produite par le bactériophage T7 et est isolée en infectant des cellules d'E. Coli. La fonction principale de la ligase T7 est de ligaturer les duplex d'ADN via des liaisons phosphodiester et de joindre des fragments d'ADN à proximité pendant les expériences de clonage. Le pH optimal de l'ADN ligase T7 se situe entre 7,0 et 7,2. La ligase T7 est dépendante de l'ATP. Les ADN ligases T7 sont également capables d'hybrider ADN et ARN hybrides, donnant lieu à des conformations anormales lors de la transcription; cependant, ce phénomène est toujours à l'étude par des études in vitro.
Quelles sont les similitudes entre l'ADN ligase T4 et T7?
- Les ADN ligases T4 et T7 participent à une réaction de ligature en annulant des duplex d'ADN par la formation d'une liaison phosphodiester entre l'extrémité 3 'OH et l'extrémité phosphate 5' du fragment d'ADN.
- Les deux enzymes ligaturent des duplex d'ADN à extrémités franches qui sont très proches les uns des autres.
- Les deux enzymes dépendent de l'ATP.
- Ces enzymes sont isolées en infectant des cellules d'E. Coli avec le bactériophage particulier.
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Les applications des deux enzymes comprennent:
- Clonage moléculaire - pour ligaturer le gène d'intérêt au vecteur
- Réparation de l'ADN - pour réparer les niches double brin
- Réplication d'ADN in vitro
- Réaction en chaîne par ligase
Quelle est la différence entre l'ADN ligase T4 et T7?
Diff article au milieu avant la table
Ligase ADN T4 vs T7 |
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| T4 ADN ligase de type ADN ligase isolée du bactériophage T4 et est impliquée dans la ligature de fragments d'ADN adjacents via la formation de liaisons phosphodiester. | T7 ADN ligase de type ADN ligase isolée du bactériophage T7 et est impliquée dans la ligature de fragments d'ADN adjacents via la formation de liaisons phosphodiester. |
| Taille de la protéine | |
| La taille de l'ADN ligase T4 est de 77 kDa - plus grande que celle de l'ADN ligase T7. | La taille de l'ADN ligase T7 est de 41 kDa. |
| PH optimal | |
| La plage de pH qui fonctionne ADN ligase T4 est de 7,5 à 8,0. | La plage de pH qui fonctionne ADN ligase T7 est de 7,0 à 7,2. |
Résumé - T4 vs T7 DNA Ligase
Les ADN ligases sont une classe importante d'enzymes impliquées dans le clonage moléculaire pour produire des molécules d'ADN recombinant contenant le gène d'intérêt. La réaction de ligature est une réaction utilisant l'énergie et de nouvelles études de recherche sont en cours pour améliorer la précision en modulant les ligases disponibles. Les ADN ligases T4 et T7 sont deux types d'enzymes ADN ligases importantes utilisées dans les techniques de biologie moléculaire. L'ADN ligase T7 est également le résultat d'une recherche basée sur la ligase primaire isolée d'E. Coli infectée par T4. Le T7 est décrit avec plus d'efficacité et de précision dans l'exécution de sa fonction en raison de sa petite taille. C'est la différence entre la ligase T4 et T7.
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