Différence clé - Northern vs Southern vs Western Blotting
La détection de séquences spécifiques d'ADN, d'ARN et de protéines est essentielle pour divers types d'études en biologie moléculaire. L'électrophorèse sur gel est une technique qui sépare l'ADN, l'ARN et les protéines en fonction de leur taille. À partir des profils de gel, une séquence d'ADN, une séquence d'ARN ou une protéine particulière sont détectées par les techniques spéciales appelées transfert et hybridation avec des sondes marquées. Il existe trois types de méthodes de buvardage, à savoir le sud, le nord et l'ouest. La principale différence entre le transfert nord-sud et ouest réside dans le type de molécule qu'il détecte à partir d'un échantillon. Le transfert de Southern est une méthode qui détecte une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN. Le transfert de Northern est une technique qui détecte une séquence d'ARN spécifique à partir d'un échantillon d'ARN. Le Western blot est une méthode qui détecte une protéine spécifique à partir d'un échantillon de protéines.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que le Southern Blot
3. Qu'est-ce que le Northern Blot
4. Qu'est-ce que le Western Blot
5. Comparaison côte à côte - Northern vs Southern vs Western Blot
6. Résumé
Qu'est-ce que Southern Blotting?
La technique de transfert de Southern a été développée par EM Southern en 1975 pour l'identification d'une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN. Il s'agit de la première technique de transfert introduite en biologie moléculaire. Il a permis la détection de gènes spécifiques à partir de l'ADN, de fragments spécifiques d'ADN, etc. Plusieurs étapes sont impliquées dans la technique de Southern blot. Ils sont les suivants.
- L'ADN est isolé de l'échantillon et digéré avec des endonucléases de restriction.
- L'échantillon digéré est séparé par électrophorèse sur gel d'agarose.
- Les fragments d'ADN dans le gel sont dénaturés en un seul brin par l'utilisation d'une solution alcaline.
- L'ADN simple brin est transféré sur une membrane filtrante en nitrocellulose par transfert capillaire.
- L'ADN transféré est fixé sur la membrane en permanence.
- L'ADN fixé sur la membrane est hybridé avec des sondes marquées.
- L'ADN non lié est lavé de la membrane par lavage.
- Un film radiographique est exposé à la membrane et une autoradiographie est préparée.
Southern blot est appliqué pour différents aspects de la biologie moléculaire. Il est utile dans la cartographie RFLP, les études médico-légales, la méthylation de l'ADN dans l'expression génique, la détection de gènes mutés dans les troubles génétiques, la prise d'empreintes ADN, etc.
Figure 01: Technique de transfert Southern
Qu'est-ce que le Northern Blotting?
Le transfert Northern est une méthode conçue pour détecter une séquence d'ARN ou une séquence d'ARNm spécifique à partir d'un échantillon pour étudier l'expression génique. Cette technique a été développée par Alwine, Kemp et Stark en 1979. Elle diffère des techniques de buvardage sourthern et occidental en raison de plusieurs étapes. Cependant, cette technique est également réalisée par électrophorèse sur gel, transfert et hybridation avec des sondes marquées spécifiques et détection. La technique de transfert de Northern est effectuée comme suit.
- L'ARN est extrait de l'échantillon et séparé par électrophorèse sur gel.
- L'ARN est transféré du gel sur une membrane de transfert et fixé.
- La membrane est traitée avec une sonde marquée préparée à partir d'ADNc ou d'ARN (la sonde est complémentaire d'une séquence spécifique dans l'échantillon).
- La sonde est incubée avec la membrane pour se lier à une séquence spécifique.
- Les sondes non liées sont lavées.
- Les fragments hybrides sont détectés par une autoradiographie.
Le transfert de Northern est un outil important dans la détection et la quantification de l'ARNm hybridé, l'étude de la dégradation de l'ARN, l'évaluation de la demi-vie de l'ARN, la détection de l'épissage de l'ARN, l'étude de l'expression des gènes, etc.
Figure 02: Northern Blot
Qu'est-ce que le Western Blotting?
Le Western blot est une méthode de détection d'une protéine spécifique à partir d'un mélange de protéines à l'aide d'un anticorps marqué. Par conséquent, le Western blot est également connu sous le nom d'immunoblot. Cette technique a été introduite par Towbin et al en 1979 et elle est maintenant effectuée en routine dans les laboratoires pour l'analyse des protéines. Les étapes sont les suivantes.
- Les protéines sont extraites de l'échantillon
- Les protéines sont séparées par leur taille en utilisant une électrophorèse sur gel de polyacrylamide
- Les molécules séparées sont transférées dans une membrane PVDF ou une membrane de nitrocellulose par électroporation
- La membrane est bloquée pour une liaison non spécifique avec les anticorps
- Les protéines transférées sont liées à un anticorps primaire (anticorps marqués par une enzyme).
- La membrane est lavée pour éliminer les anticorps primaires non liés spécifiquement
- Les anticorps liés sont détectés en ajoutant un substrat et en détectant le précipité coloré formé
Le Western blot est utile dans la détection d'anticorps anti-VIH dans un échantillon de sérum humain. Le Western blot peut également être utilisé comme test de confirmation de l'hépatite B et test définitif de la maladie de la vache folle.
Figure 03: Western Blot
Quelle est la différence entre Northern Southern et Western Blotting?
Diff article au milieu avant la table
Northern vs Southern vs Western Blotting |
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| Type de molécule détectée | |
| Northern Blot | Le transfert Northern détecte une séquence d'ARN spécifique à partir d'un échantillon d'ARN. |
| Southern Blot | Southern blot détecte une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN. |
| Western Blot | Le Western blot détecte une protéine spécifique à partir d'un échantillon de protéines. |
| Type de gel | |
| Northern Blot | Cela utilise un gel d'agarose / formaldéhyde. |
| Southern Blot | Cela utilise un gel d'agarose. |
| Western Blot | Cela utilise un gel de polyacrylamide. |
| Méthode de transfert | |
| Northern Blot | Il s'agit d'un transfert capillaire. |
| Southern Blot | Il s'agit d'un transfert capillaire. |
| Western Blot | Il s'agit d'un transfert électrique. |
| Sondes utilisées | |
| Northern Blot | Sondes ADNc ou ARN marquées radioactivement ou non radioactivement. |
| Southern Blot | Les sondes ADN sont marquées radioactivement ou non radioactivement. |
| Western Blot | Les anticorps primaires sont utilisés comme sondes. |
| Système de détection | |
| Northern Blot | Cela se fait à l'aide d'un autoradiographe ou de la détection de la lumière ou du changement de couleur. |
| Southern Blot | Ceci est fait à l'aide d'un autoradiographe, détection de la lumière ou changement de couleur. |
| Western Blot | Cela se fait en utilisant la détection de la lumière ou du changement de couleur. |
Résumé - Northern vs Southern vs Western Blotting
Le transfert est une technique spéciale développée pour l'identification d'ADN, d'ARN ou de protéines spécifiques à partir des échantillons. Il existe trois procédures de transfert distinctes, à savoir le nord, le sud et l'ouest, pour détecter un type spécifique de molécule. La technique de transfert de Northern est conçue pour détecter une séquence d'ARN spécifique à partir d'un mélange d'ARN. La technique de transfert de Southern permet la détection d'une séquence d'ADN spécifique à partir d'un échantillon d'ADN et la technique de transfert de Western est développée pour identifier une protéine spécifique à partir d'un mélange de protéines.
