Différence clé - Trypsinisation à chaud ou à froid
La trypsinisation à chaud et à froid sont deux méthodes utilisées dans la désagrégation enzymatique des cellules en culture de cellules animales. La principale différence entre la trypsinisation chaude et froide, comme son nom l'indique, dépend de la température à laquelle la trypsine est ajoutée pour la désagrégation cellulaire. La trypsinisation à chaud a lieu dans des conditions de température plus élevée (36,5 - 37 0 C) tandis que la trypsinisation à froid a lieu dans des conditions de basse température.
Au cours du processus de culture cellulaire primaire de cellules animales, trois méthodes principales sont utilisées et se sont avérées efficaces. Les trois méthodes comprennent la désagrégation mécanique des cellules, la désagrégation enzymatique des cellules et la technique de l'explant primaire. La désagrégation enzymatique des cellules conduisant à l'isolement des cellules et se fait par l'enzyme de dégradation des protéines, la trypsine. Par conséquent, ce processus est connu sous le nom de trypsinisation. La trypsinisation peut être effectuée dans deux conditions différentes, à savoir la trypsinisation à chaud et la trypsinisation à froid. La trypsinisation à chaud est la méthode de traitement des cellules avec de la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36,5 à 37 0C. La trypsinisation à froid est le processus de traitement à la trypsine qui a lieu dans des conditions plus froides, de préférence dans de la glace maintenant des températures très basses.
CONTENU
1. Aperçu et différence clé
2. Qu'est-ce que la trypsinisation à chaud
3. Qu'est-ce que la trypsinisation à froid
4. Similitudes entre la trypsinisation à chaud et à froid
5. Comparaison côte à côte - Trypsinisation à chaud et à froid sous forme tabulaire
6. Résumé
Qu'est-ce que la trypsinisation à chaud?
La trypsinisation peut être effectuée pour désagréger les composants cellulaires afin d'isoler les cellules pour produire une culture cellulaire primaire. La trypsine est une enzyme de dégradation des protéines et le mélange d'enzymes utilisé dans la trypsinisation peut être soit un extrait brut, soit un produit purifié. On dit que l'extrait brut est plus efficace dans la lyse des protéines et la désintégration cellulaire car il contient d'autres enzymes de dégradation.
La trypsinisation à chaud est la méthode enzymatique la plus couramment utilisée pour la désagrégation cellulaire qui a lieu dans des conditions de température plus élevée. Avant le traitement par trypsinisation, le tissu souhaité est coupé en morceaux plus petits. Cela facilite le processus de désagrégation facile. Le tissu haché est ensuite lavé dans un milieu spécial connu sous le nom de milieu de Dissection Basal Salt.
A l'issue de l'étape de lavage, les cellules sont transformées dans un ballon contenant l'enzyme active, qui est la trypsine. Comme cette technique implique un protocole de trypsinisation à chaud, la trypsine est placée à une température d'environ 37 0 C pendant environ quatre heures.
Figure 01: Trypsine
Le contenu est mélangé et agité en utilisant des méthodes de centrifugation pour la facilité du protocole et pour accélérer le processus de désagrégation. Une fois le temps recommandé atteint, les cellules peuvent être dérivées du surnageant. Les cellules dérivées du surnageant sont ensuite incubées à une température et une durée particulières.
Qu'est-ce que la trypsinisation à froid?
La trypsinisation à froid est l'autre type de trypsinisation qui a lieu dans des conditions froides. Dans cette technique, les cellules hachées et lavées sont placées dans des flacons sur glace puis imbibées de trypsine. La période de trempage est beaucoup plus longue - environ 6 à 24 heures.
Une fois la procédure de trempage terminée, la trypsine est retirée du lysat cellulaire et les morceaux de tissu sont en outre incubés à 37 ° C pendant environ 20 à 30 minutes. La désagrégation des cellules est réalisée par pipetage répété du mélange tissulaire. Cela permettra aux cellules de se dissocier de la membrane et de venir vers le surnageant. Une fois que les cellules sont dans le surnageant, elles sont incubées et cultivées à une température et une durée souhaitées.
La méthode de trypsinisation à froid présente plusieurs avantages
- Rendement plus élevé de cellules viables car les dommages cellulaires sont minimisés. Les dommages cellulaires sont minimisés en n'utilisant pas d'étapes de centrifugation.
- Méthode très pratique.
- Moins laborieux.
La principale limitation de la méthode de trypsinisation à froid est que de grandes quantités ne peuvent pas être utilisées dans un seul cas.
Quelles sont les similitudes entre la trypsinisation à chaud et à froid?
- Les processus de trypsinisation à chaud et à froid utilisent l'enzyme trypsine pour la désagrégation des cellules.
- Les processus de trypsinisation à chaud et à froid sont utilisés dans les procédures de culture cellulaire pour la désagrégation des cellules.
- Dans les procédures de traitement de trypsinisation à chaud et à froid, les cellules sont dérivées du surnageant.
Quelle est la différence entre la trypsinisation à chaud et à froid?
Diff article au milieu avant la table
Trypsinisation à chaud ou à froid |
|
| La trypsinisation à chaud est la méthode de traitement des cellules avec de la trypsine dans des conditions chaudes à une température de 36,5 à 37 0. | La trypsinisation à froid est le processus de traitement à la trypsine qui a lieu dans des conditions plus froides, de préférence dans de la glace maintenant des températures très basses. |
| Protocole | |
| Les morceaux de tissu hachés sont maintenus à 37 0 C en continu tout au long de la procédure. | Les fragments de tissu coupés sont initialement maintenues à des températures glaciales, puis maintenues à 37 0. |
| Température | |
| La trypsinisation à chaud se produit à 36,5 - 37 0 | La trypsinisation à froid se produit à des températures glaciales. |
| Le temps consommé | |
| Moins de temps requis pour l'ensemble du processus (environ 4 heures) de trypsinisation à chaud. | Temps plus long requis (environ 6 à 24 heures) pour la trypsinisation à froid. |
| Rendement des cellules viables | |
| Faible trypsinisation à chaud. | Forte en trypsinisation à froid. |
| Utilisation de la centrifugation | |
| La centrifugation est nécessaire pour la désagrégation des cellules dans la trypsinisation à chaud. | La centrifugation n'est pas nécessaire pour la trypsinisation à froid. |
| Quantité de tissu initiale pour la trypsinisation | |
| Une plus grande quantité de tissu peut être utilisée pour la trypsinisation à chaud. | Une plus petite quantité de tissu peut être utilisée pour la trypsinisation à froid. |
| Dommages cellulaires | |
| Élevé en raison de la centrifugation dans la trypsinisation à chaud. | Moins en raison de la trypsinisation à froid. |
Résumé - Trypsinisation à chaud ou à froid
La trypsinisation est la méthode d'utilisation de l'enzyme de dégradation des protéines trypsine pour la désagrégation et la préparation de cultures cellulaires primaires pendant le processus de culture cellulaire. Il existe deux techniques principales de trypsinisation basées sur les températures utilisées pendant la procédure. Ils sont trypsinisés à chaud et à froid. La trypsinisation à chaud est réalisée à 37 0 C tandis que la trypsinisation à froid est réalisée dans des conditions glacées. Bien que la trypsinisation à froid prenne plus de temps pour se terminer, on dit qu'elle a un rendement plus élevé de cellules viables. Cela est dû au fait que les dommages cellulaires sont minimisés lors de la trypsinisation à froid car elle n'utilise pas d'étapes de centrifugation vigoureuses. C'est la différence entre la trypsinisation à chaud et à froid.
